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Einleitung 12

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1.3 Zielsetzung dieser Arbeit

1.3.1 Mutationsanalyse

Im Vordergrund dieser Arbeit steht die Mutationssuche und deren Analyse.

Untersucht werden zwei Gene (ROMK und ClC-Kb), bei denen bereits

Mutationen bei verschiedenen Formen des Bartter-Syndroms beschrieben

wurden, deren endgültige Bedeutung aber noch nicht hinreichend geklärt ist.

Bei der Auswahl der Patientenkohorte war maßgebend, dass die Patienten

einen HPS- oder einen cBS-Phänotyp bzw. einen überschneidenden Phänotyp

aufwiesen. Alle Patienten sind so lange sowohl im ROMK als auch im ClC-Kb-

Gen untersucht worden, bis beide heterozygoten bzw. eine homozygote

Mutation identifiziert worden ist.

Ziel dieser Mutationsanalyse ist es, die Bedeutung von ROMK und ClC-Kb in

Bezug auf die Pathogenese zu unterstreichen und die Bedeutung

verschiedener Mutationen zu klären bzw. zu diskutieren.

1.3.1.1 Vorgehensweise

Zu Beginn wurde für die Mutationsanalyse ein Kollektiv aus 71 Patienten

zusammengestellt. Aufgenommen wurden Patienten, die sich aufgrund des in

Kapitel 7 beigefügten Fragebogens entsprechend ihrer klinischen Auffälligkeiten

entweder dem HPS, dem cBS bzw. sich nicht eindeutig einer der beiden

Gruppen zuordnen ließen, ein Gitelman-Syndrom allerdings unwahrscheinlich

war.

Im Anschluss an die Zuordnung zu einer der Entitäten wurde für die

molekulargenetische Untersuchung die DNA der Patienten extrahiert, um diese

anschließend in den entsprechenden Genen auf Mutationen hin untersuchen zu

können.

Zu Beginn der Mutationsanalyse wurden die Kandidatengene mittels PCR

amplifiziert und im Folgenden einer Screening-Untersuchung mit Hilfe des

Single-strand-conformation-polymorphism analysis (SSCP) unterzogen (siehe

dazu auch Kapitel 2.6). Die hohe Sensitivität dieses Verfahrens ermöglicht die

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